超氧陰離子清除能力生化測試試劑盒
測定原理:根據Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。
需自備的儀器及用品:可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻待用。
試劑三:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入3mL雙蒸水,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入25mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑六:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入25mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑七:液體25mL×1瓶,室溫保存。
試劑八:10mmol/L標準磷貯備液10mL×1瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL標準磷應用液配制:將試劑八20倍稀釋,即取0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制:按H2O:試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。
超氧陰離子清除能力生化測試試劑盒
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
樣品酶液的制備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。